轉染是一種常見的實驗室細胞培養(yǎng)技術，用于許多研究領域、藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)。 體外轉染是指將貨物分子（例如核酸 – DNA或RNA）輸送到培養(yǎng)的細胞（通常是癌細胞系）中。 體內 轉染是指將貨物分子（如治療性 siRNA、質粒 DNA、小蛋白等）遞送至靶組織。有針對 體外 和 體內 轉染優(yōu)化的市售轉染產品，以及生物 CRO 提供的轉染服務經過 GLP 認證，可以根據 FDA 的要求進行這些臨床前實驗。

轉染方法包括通過非病毒技術進行的各種方法（物理和化學方法）——電穿孔、磷酸鈣暴露、基于脂質體的轉染，允許通過細胞膜遞送貨物分子而不會對細胞造成長久的損傷。下面描述了幾種化學轉染方法。

化學轉染方法

由于可供購買的轉染試劑簡單、成本高且種類繁多，化學轉染是一種流行的技術。瞬時轉染通常用于持續(xù)數(shù)天的所需基因的短期表達。研究應用包括基因表達研究、基因沉默研究和重組蛋白分析。

化學轉染實驗的工作流程在各種細胞類型中都很常見。這包括在亞匯合處接種細胞，在轉染前立即制備轉染試劑/DNA 復合物，然后評估構建體的表達。細胞培養(yǎng)基在接種細胞后一天更新，然后在轉染后幾小時更新。必須對轉染方案進行優(yōu)化，以確保高轉染效率，并且該方法對被轉染的細胞無毒。

脂質體轉染是使用脂質體的轉染，脂質體是可以與細胞膜融合并能夠釋放其內容物的小分子。脂質體可以是基于脂質的（更常見），也可以是基于非脂質的。帶正電荷的陽離子聚合物與帶負電荷的核酸結合良好，是另一種轉染方法。脂質體轉染方法在新藥發(fā)現(xiàn)和開發(fā)中有多種常見應用，尤其是在腫瘤學中，其中的應用包括通過基于小分子的藥物靶向特定基因（例如致癌基因）或使用 RNAi 技術進行基因沉默。

物理轉染方法

電穿孔和細胞注射（例如基因槍）是物理轉染方法的兩個經典例子，它們能夠完成核酸的遞送，但由于細胞膜的破壞而對細胞很苛刻并且經常導致細胞死亡。對于傳統(tǒng)上難以轉染的細胞來說，這是一個合適的選擇。物理轉染涉及電穿孔、顯微注射和基因槍粒子遞送。

電穿孔取決于 DNA 濃度和所用細胞的類型。傳統(tǒng)的電穿孔需要使用電穿孔比色皿。許多公司銷售的電穿孔系統(tǒng)與從原代細胞和干細胞到原核細胞和哺乳動物細胞的細胞類型兼容。

顯微注射通常用于將 DNA 和 RNA 引入單個細胞，例如胚胎干細胞。借助顯微操作器和顯微鏡，DNA 或 RNA 直接插入細胞質或細胞核。這通常很耗時，但會產生非常高的轉染效率。

基因槍顆粒遞送依賴于攜帶核酸的微粒將 DNA 或 RNA 引入細胞。一種快速的方法，將這些顆粒射入細胞，但缺點是細胞死亡率很高。

轉染方案和實驗細節(jié)

雖然轉染是一種非常廣泛和有用的技術，但它對被轉染的細胞類型具有高度特異性。一些細胞更適合轉染，而另一些細胞則不適合，因此一些細胞對某些轉染試劑更敏感。細胞系的廣泛多樣性和與每個細胞系相關的具體細微差別需要一本教科書來充分描述，但值得慶幸的是，轉染試劑可以幫助實驗發(fā)揮作用，而無需進行廣泛的背景研究。許多公司開發(fā)了專門針對特定細胞類型優(yōu)化的轉染試劑，從而確?；蚓庉媽嶒灥淖畲笮?。

在設計轉染實驗時，了解轉染的最終目標尤為重要；穩(wěn)定表達需要與瞬時轉染不同的設置，因此，應調整實驗方案。如果時間緊迫，那么轉染實驗可以外包給可靠的公司，這些公司可以保證為研究應用開發(fā)穩(wěn)定或瞬時細胞系。

Altogen Biosystems 的體內轉染試劑 

RNAi 已用于使用動物模型的體內目標驗證研究。在體內進行 RNAi 研究的主要挑戰(zhàn)是將功能性小 RNA 分子有效、定向地遞送到特定組織中。 Altogen® In Vivo Transfection Reagents 可以與 siRNA（或 microRNA）結合，并通過瘤內 (it) 或通過靜脈 (iv) 尾靜脈注射進行全身給藥，以在特定組織（包括肝臟、胰腺、腎臟和腫瘤。早在注射后 24 小時就可以看到選擇性擊倒。

Altogen Biosystems 的特色體內轉染產品：  

體內納米顆粒轉染試劑盒 || 體內脂質轉染試劑盒 || 體內胰腺靶向轉染試劑盒     

Altogen Custom Services 提供專業(yè)的生物技術和制藥服務，包括60 多種經過驗證的異種移植模型、穩(wěn)定細胞系的開發(fā)、RNA 干擾 (RNAi) 服務、分析開發(fā)、ELISA 和蛋白質印跡服務、siRNA 文庫篩選和轉染服務。穩(wěn)定表達細胞系的生成可能非常昂貴且耗時。Altogen Labs 提供僅需 28 天即可完成的穩(wěn)定細胞系生成服務。  

轉染方法和細胞轉染技術

細胞轉染是一種實驗室技術，用于將核酸（例如 DNA、RNA 或 siRNA）輸送到細胞中以修飾其基因表達或研究基因功能。該技術涉及使用轉染試劑將核酸引入細胞，這有助于它們進入細胞。

細胞轉染通常包括以下步驟：

1. 轉染試劑的選擇：研究人員選擇與被轉染的細胞類型和被遞送的核酸類型兼容的轉染試劑。

2. 核酸的制備：通過從天然來源分離它們或在實驗室中合成它們來制備核酸。

3. 轉染復合物的形成：核酸與轉染試劑混合形成可進入細胞的復合物。

4. 細胞轉染：將轉染復合物加入細胞中，孵育細胞，使核酸進入細胞。

5. 轉染效率分析：通過使用 PCR、蛋白質印跡或熒光顯微鏡等技術測量遞送核酸的基因表達水平來評估轉染效率。

細胞轉染是研究基因功能和開發(fā)遺傳疾病或癌癥新療法的寶貴工具。然而，轉染的效率和特異性會受到多種因素的影響，包括轉染試劑的選擇、被轉染的細胞類型和實驗條件。因此，仔細優(yōu)化轉染條件和適當?shù)目刂茖τ诖_保轉染實驗的可靠性和可重復性非常重要。