OptiVitro® T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

? 無血清，無異種成分，無外源生長因子
? 支持T細(xì)胞的快速增殖和高密度培養(yǎng)，可用于大規(guī)模工藝流程
? 提供瓶裝&袋裝兩種形式，便于生產(chǎn)規(guī)模擴大和商業(yè)化開發(fā)
? 適合于多種激活方法，可支持較長周期的穩(wěn)定培養(yǎng)（＞14天）
? 自主研發(fā)，供貨穩(wěn)定，可提供定制化服務(wù)（配方優(yōu)化等）
? 按照GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和管理， 完成FDA DMF備案

應(yīng)用：適合用于擴增人外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中的 T 細(xì)胞，也適合于 T 細(xì)胞的重激活擴增培養(yǎng)。應(yīng)用于T細(xì)胞療法開發(fā)，如CAR-T、TCR-T、TIL等。

• 常見問題

  1. 組分：
  本產(chǎn)品每1L基礎(chǔ)培養(yǎng)基配發(fā)8mL添加組分，添加組分不是ICSR或者血替，化學(xué)成分明確，可放心使用，必須配成全培養(yǎng)基后再使用；——可以提供成分說明及TSE/BSE的申明。
  2. T細(xì)胞激活方式：
  使用本產(chǎn)品，可根據(jù)說明書用抗體包板方式進行激活，也可購買商業(yè)抗體偶聯(lián)磁珠進行激活，本產(chǎn)品同樣支持磁珠激活。
  3. 活率：
  直接培養(yǎng)PBMC，D5后活率可達90%以上，從PBMC中分選出T細(xì)胞，則D3開始活率可達到90%以上，D7后活率均可達到95%以上；如果轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR，轉(zhuǎn)導(dǎo)當(dāng)天活率顯著下降，為正常現(xiàn)象，繼續(xù)培養(yǎng)活率會持續(xù)上升。
  4. 培養(yǎng)方式：
  使用本產(chǎn)品，比較推薦的培養(yǎng)方式是D0天激活，D3、D5、D7補充培養(yǎng)液將細(xì)胞密度調(diào)整到0.5-1x10^6cells/ml,D7后可選擇2天或3天補一次液。
  5. T細(xì)胞擴增速度：
  T細(xì)胞的擴增在D3-D9速度較快，基本平穩(wěn)，D9細(xì)胞擴增倍數(shù)一般可以達到200倍以上。D9后細(xì)胞擴增速度逐漸減緩，激活PBMC中的T細(xì)胞，最多可培養(yǎng)20天。
  6. 高密度培養(yǎng)：
  靜置培養(yǎng)，密度可達5-6x10^6 cells/ml，搖瓶培養(yǎng)或其他震蕩培養(yǎng)方式，密度可達10x10^6 cells/ml以上。
  7. CD4/CD8比例調(diào)節(jié)：
  使用本產(chǎn)品并且用磁珠激活，CD4比例較高，用抗體包板激活則CD8比例較高，可以通過改變激活方式、改變抗體包板濃度，調(diào)節(jié)CD4/CD8比例。
  8. T細(xì)胞亞型分群：
  Tn為初始T細(xì)胞，Tcm為中央記憶型T細(xì)胞，Tem為激活的Tcm，Tef為效應(yīng)T細(xì)胞，分群比例隨著細(xì)胞培養(yǎng)的時間而變化。不同客戶對分群的要求可能不同，且不同激活方式、細(xì)胞因子的選擇以及濃度，對分群影響很大，建議客戶自行測試。
  9. T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)：
  根據(jù)客戶反饋測試數(shù)據(jù)，本產(chǎn)品陽性率可達到50%左右，但是不同客戶使用的工藝不同，可能導(dǎo)致陽性率有變化。CAR慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，可使用polybrene輔助轉(zhuǎn)導(dǎo)，逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可使用retronectin輔助轉(zhuǎn)導(dǎo)，也有許多新型輔助因子可提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率；采用離心轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式可提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
  10. T細(xì)胞生物反應(yīng)器培養(yǎng)：
  靜置培養(yǎng)后D5-D7開始在反應(yīng)器中培養(yǎng)，在達到目標(biāo)體積之前，可以2-3天補液細(xì)胞密度調(diào)整到0.5-1x10^6 cells/ml，到達目標(biāo)體積后可以采取部分灌流策略。