生物學(xué)家可以利用多種儀器和消耗品檢測來探索總體細胞計數(shù)和細胞活力。血細胞計數(shù)法是手動細胞計數(shù)的傳統(tǒng)工具，Trypan blue是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)實驗室中使用普遍的細胞排除染料之一。然而，排除染料臺盼藍仍然是細胞計數(shù)應(yīng)用的關(guān)鍵組成部分，而過時的血細胞計數(shù)器已逐漸被 DeNovix CellDrop™ 等創(chuàng)新型自動細胞計數(shù)器所取代。

 即使是基于載玻片的自動化細胞計數(shù)也無法與 CellDrop DirectPipette™技術(shù)建立的標準競爭 ，該技術(shù)可以提高臺盼藍等排除染料的功效。

Trypan blue是主要的細胞排除染料之一，用于區(qū)分溶液中的活細胞和死細胞，以計算總體活力。它通過滲透受損細胞膜并與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合來對死細胞進行染色，從而產(chǎn)生深藍色外觀。這篇文章將更深入地探討臺盼藍細胞計數(shù)的一般原理和局限性。

概述Trypan blue細胞計數(shù)

Trypan blue是一種偶氮染料，用作多種排除染色劑之一，用于測量懸浮液中活細胞的數(shù)量，利用活細胞膜抵抗某些化學(xué)染色劑滲透的原理。用臺盼藍檢測的細胞懸浮液將理想地顯示具有透明細胞質(zhì)（活細胞）和藍色細胞質(zhì)（死細胞）的細胞。這有利于使用光學(xué)顯微鏡進行簡單的細胞計數(shù)。

典型臺盼藍細胞計數(shù)測試的一般程序如下：

• 將微量 (μl) 細胞懸浮液和 0.4% 臺盼藍染料在蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng) (PBS) 中混合，以達到所需的比例并使測定的樣品均質(zhì)化。

• 在室溫下孵育適當(dāng)?shù)臅r間，以確保準確測量細胞活力。

• 可選：在細胞計數(shù)之前進行顆粒化和重懸，并根據(jù)需要過濾以去除溶液中的聚集物。

• 將微量樣品移入血細胞計數(shù)器的計數(shù)區(qū)域、細胞計數(shù)一次性玻片上，或直接移至 CellDrop 的光學(xué)計數(shù)室中。

• 使用血細胞計數(shù)器的網(wǎng)格線手動計數(shù)染色和未染色的細胞，或在自動細胞計數(shù)系統(tǒng)上運行適當(dāng)?shù)能浖?，以自動獲取準確的活力測量值。

臺盼藍細胞計數(shù)的局限性

盡管Trypan blue被廣泛用于細胞計數(shù)和活力測試，但它也存在局限性，這使得傳統(tǒng)測量變得復(fù)雜。例如，與血清蛋白相比，Trypan blue對細胞蛋白的親和力降低，可能會為細胞形態(tài)的可視化創(chuàng)造具有挑戰(zhàn)性的條件。這可能需要對樣品進行分析，然后將其重新懸浮在額外的無蛋白質(zhì)緩沖液中，然后才能進行細胞計數(shù)。