無血清細胞凍存液 Plus，產品編碼：PZ210R。

無血清細胞凍存液 Plus，

Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

01/產品概述

細胞藥物作為繼化學藥、生物藥之后出現(xiàn)的新型藥物在臨床上的應用越來越廣泛。尤其，干細胞治療和免疫細胞治療在退行性、損傷性、遺傳缺陷性疾病以及腫瘤的治療中具有巨大的優(yōu)勢和廣闊的發(fā)展前景，而高效安全的細胞制劑是細胞治療中的關鍵因素。在細胞培養(yǎng)中，細胞凍存是最關鍵環(huán)節(jié)之一，尤其在細胞治療、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。

傳統(tǒng)的程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基、血清、DMSO。血清大多采用胎牛血清，含有動物源性物質，成分復雜，血清中未知成分和病毒等感染物質會給凍存帶來影響與風險。該方法在科研上廣泛使用，但是顯然已經不能適應現(xiàn)今細胞治療的應用場景。

針對干細胞和免疫細胞的凍存，LeapWalTM Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x)，是一種化學成分明確、無動物源成分、使用醫(yī)藥級原料的即用型細胞凍存液，尤其適合淋巴細胞和干細胞的凍存。這款產品操作簡單，無需程序降溫，無動物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低，不僅能有效、安全地保護細胞，同時，使用藥用級原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異。適用于干細胞、免疫細胞以及大多數(shù)細胞系凍存。

02/產品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期12個月。若長期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24個月。

04/產品特點

即用型細胞凍存液，無需程序降溫，可直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5年）

安全性高，無動物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低

復蘇后的細胞存活率優(yōu)異，復蘇率高達90% 以上，細胞活力好

使用藥用級原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

一：細胞凍存步驟

1. 選擇處于指數(shù)生長期的細胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 重懸細胞，制成細胞懸液。

? 按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x106 至5x106 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時，方可移至液氮罐中長期保存。

二：凍存細胞復蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含*培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘，收集細胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細胞，接種到事先準備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細胞分布均勻。

5. 鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法進行細胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)5-24h后，觀察細胞狀態(tài)，可視情況更換新鮮細胞培養(yǎng)液。

07/適用范圍

LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 適用于干細胞、免疫細胞以及大多數(shù)細胞系凍存。該款凍存液使用藥用級原料，化學成分明確，適合細胞儲存、細胞治療以及科學研究等不同場景使用。

08/質量控制

LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 通過嚴格的內毒素、滲透壓、pH測試和無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）。

09/注意事項

1. 若長期不用，本產品可-30℃至-10℃保存，再次使用時，請在2-8℃融化LeapWalTM  Cell Freezing Medium Plus(1x)，避免反復凍融。

2. 使用LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 凍存細胞后，應盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存。

3. LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其適合淋巴細胞或干細胞凍存，建議第一次使用本產品凍存細胞時，先對其進行試驗性凍存、復蘇、培養(yǎng)的預實驗，確認性能后再進行正式凍存。

4. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率。

5. 免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產品所發(fā)生的意外負責。

6. 為了您的健康安全，請規(guī)范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗。

7. 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

10/實驗案例分析

一、凍存細胞復蘇存活率檢測

1. 選擇處于對數(shù)生長期的淋巴細胞，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為1x106 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存12個月后，進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統(tǒng)計細胞存活率。

二、凍存細胞復蘇生長曲線檢測

1. 選擇處于對數(shù)生長期的淋巴細胞，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為2x105 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存1個月后進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，繪制生長曲線。

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