人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(HCT-15)HCT-15細(xì)胞從一名男性Dukes C結(jié)直腸癌患者的大腸中分離出來(lái)。

【細(xì)胞名稱】人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

【細(xì)胞別名】HCT-15;HCT15

【種屬來(lái)源】人

【組織來(lái)源】結(jié)直腸腺癌

【細(xì)胞形態(tài)】上皮細(xì)胞樣

【生長(zhǎng)特性】貼壁生長(zhǎng)

【培養(yǎng)體系】1640+10%FBS+1%P/S

【傳代比例】1:3-1:4，每周換液2-3 次

【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】?jī)龃嬉海?5%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；存儲(chǔ)條件：液氮

【安全性】建議在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并做好個(gè)人防護(hù)。

【用途】?jī)H供科研使用

二、復(fù)蘇及傳代方法

1、細(xì)胞株的復(fù)蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化，并適當(dāng)輕輕搖晃促融。快速、全融化可以提高細(xì)胞的復(fù)蘇效果。

（2）打開(kāi)凍存管前時(shí)用75%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁。

（3）將全融化的細(xì)胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無(wú)菌15ml或其它合適無(wú)菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細(xì)胞沉淀，然后用新鮮*全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。

（4）第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。

注意：如果收到的凍存管不能及時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇，還請(qǐng)置于-80℃或液氮中進(jìn)行暫存，并盡快復(fù)蘇進(jìn)行培養(yǎng)。

2、細(xì)胞株的復(fù)蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，看是否有異常；無(wú)異常后，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過(guò)夜。

（3）第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，考慮進(jìn)行換液或傳代，傳代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項(xiàng)

1、每支凍存管約含1×106個(gè)細(xì)胞，體積為1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個(gè)T25瓶或1個(gè)6cm培養(yǎng)皿中。如果復(fù)蘇后存活率較低，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)更好。

2、如果本產(chǎn)品是常溫運(yùn)輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿*全培養(yǎng)液的貼壁細(xì)胞，收到細(xì)胞后：

（1）及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

（2）用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

（3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息。

（4）靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。

3、如果細(xì)胞密度超過(guò)85%請(qǐng)盡快進(jìn)行傳代操作；如果懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以使懸浮的細(xì)胞再次貼壁。如果收到的是常溫運(yùn)輸?shù)碾x心管裝的懸浮細(xì)胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在*次更換培養(yǎng)液時(shí)，保留一半原培養(yǎng)液，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)的不適應(yīng)，確保細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)?jiān)谏锇踩衽_(tái)中進(jìn)行操作，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)?？商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。