Invitrogen：Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 568

為減少交叉反應，這些山羊抗兔IgG（H+L）整體二級抗體經(jīng)過親和純化并交叉吸附于牛IgG、山羊IgG、小鼠IgG、大鼠IgG和人類IgG。交叉吸附或預吸附是一種純化步驟，旨在提高抗體特異性，從而提高靈敏度并減少背景染色。二級抗體溶液通過含有可能交叉反應物種的固定血清蛋白的柱狀基質(zhì)。只有非特異性結(jié)合的二級抗體被捕獲在柱中，高度特異性的二級抗體則通過。這一額外步驟的好處在多重復用/多色染色實驗（如流式細胞術(shù)）中顯而易見，這些實驗可能與其他原級抗體有交叉反應性，或在組織/細胞熒光染色實驗中，可能存在內(nèi)源性免疫球蛋白。

Alexa Fluor染料是目前*值得信賴的熒光染料之一。Invitrogen™ Alexa Fluor 568染料是一款明亮的橙色/紅色熒光染料，激發(fā)性非常適合568納米激光線。為了在成像和流式細胞術(shù)中穩(wěn)定產(chǎn)生信號，Alexa Fluor 568染料在較寬的摩爾范圍內(nèi)對pH不敏感。具有高熒光量子產(chǎn)率和高光穩(wěn)定性的探針能夠以*高的靈敏度檢測低豐度生物結(jié)構(gòu)。Alexa Fluor 568染料分子可以以高摩爾比附著到蛋白質(zhì)上，無需顯著的自滅，從而實現(xiàn)更明亮的共軛物和更靈敏的檢測。每個共軛物的標記程度通常為每個IgG分子2-8個熒光團;每個產(chǎn)品批次的分析證書上會標明具體的標簽程度。

使用共軛溶液：在使用前短暫將蛋白質(zhì)軛聯(lián)溶液短暫置于微型離心機中;只把上清液加入實驗中。這一步驟有助于消除儲存過程中可能形成的蛋白質(zhì)聚集體，從而減少非特異性背景染色。由于染色方案因應用而異，應通過經(jīng)驗方法確定合適的抗體稀釋度。對于熒光團標記抗體，最終濃度為1-10 μg/mL，適用于大多數(shù)免疫組化和流式細胞術(shù)應用。

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